在近几年的山东省高考试题中，“基因工程”一直是必考题目之一，试题中与限制酶相关的题目灵活多样，难度较大。以下是一些典型例题，对限制酶的考点进行了归纳整理，希望能够提高学生的理解能力和解题能力，为高三学生的备考提供帮助.在基因工程中，切割DNA分子的工具是限制酶，这类酶能够识别并切割双链DNA分子中特定的核苷酸序列.DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端，通常有两种形式:黏性末端和平末端.切割并不是目的，目的是连接.因此，解题时要注意限制酶识别序列的特点.
二、限制酶选择的“三不一定位”原则
１．不破坏
基因表达载体中包含启动子、终止子、复制原点、目的基因和标记基因等组件.启动子是RNA聚合酶识别并结合的位点，可以驱动转录;终止子用于终止转录;复制原点是DNA复制的特定起始位点;标记基因便于重组DNA的筛选.以上组件在目的基因的复制和表达中均具有重要的作用，均不能被破坏，因此酶切位点位于组件内部的限制酶都不能使用.当然基因表达载体中往往有多个标记基因，并非都不能破坏，要至少保留一个，以用于重组DNA的鉴定和筛选.
２．不自身环化
如果使用一种限制酶切割目的基因和载体，往往会出现自身黏性末端互补连接的情况，为了避免出现自身环化的现象，一般选择两种限制酶分别切割目的基因的上下游，产生不同的黏性末端.同时使用这两种限制酶切割载体，以便目的基因和载体相连.
３．不反向连接
DNA的两条链分别是模板链和非模板链，其中的脱氧核苷酸的排列顺序不同，因此不能颠倒.目的基因和载体连接以后只有正确的连接顺序才能保证目的基因的复制与表达.例如使用一种限制酶切割目的基因和载体，目的基因两侧就会形成相同的黏性末端，所以目的基因和载体就会有正向和反向连接的两种情况.
４．“一定位”
基因工程中，所选用的限制酶酶切位点应位于启动子和终止子之间;若是质粒上存在TＧDNA，酶切位点应位于TＧDNA中，从而有利于目的基因嵌入其中，随质粒或TＧDNA复制和表达.因此，还可以根据特殊的酶切位点选择限制酶.
１．电泳
DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷.在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳.PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定.在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关.(１)DNA分子为链状.若限制酶切割后电泳出现两条电泳条带，则说明该DNA分子中含有一个限制酶的酶切位点;同理若限制酶切割后电泳出现三条电泳条带，则说明该DNA分子中含有两个限制酶的酶切位点，以此类推.(２)DNA分子为环状.若限制酶切割后电泳出现一条电泳条带，则说明该DNA分子中含有一个限制酶的酶切位点;若限制酶切割后电泳出现两条电泳条带，则说明该DNA分子中含有两个限制酶的酶切位点，以此类推.
对限制酶切割结果的考查，除了考查酶切位点的数量以外，还会判断酶切片段的长度.这一类题往往通过画图来帮助学生分析得出正确的结论.
文章来源：中学生物教学，2023年第2期。作者：熊方泽
往期推荐
1.新人教版高中《生物学》（必修1，2和选择性必修1，2，3）电子书和课本答案及视频汇总の
2.【空中课堂】新人教版高中生物学必修1、2+选择性必修1、2、3全部视频课程汇总の
3.【教师用书】新人教版高中生物学必修1、2+选择性必修1、2、3（含课后答案）の
4.经典视频日本动漫《工作细胞》第一季和第二节の
5.2019年新人教版高中生物学必修1、2（电子书+课后习题答案）の
6.2019年新人教版高中教科书《生物学》【选择性必修1，2，3 】电子书和教材问题答案の
7.新人教版必修教材部分概念变化摘录の
8.2020-2021年人教版高中《生物学》新教材网络培训及网络答疑汇总の
9.2020年人教版高中生物学新教材网络答疑の
10.2021年人教版高中生物学新教材网络答疑の
11.2019年新人教版高中生物学教材全部实验视频の
12.新人教版-高中生物学五本教材问题答案の
13.新人教版-必修1《分子与细胞》生物-课本问题答案の
14.新人教版-必修2《遗传与进化》生物-课本问题答案の
15.新人教版-选择性必修1《稳态与调节》课本问题答案の
16.新人教版-选择性必修2《生物与环境》课本问题答案の
17.新人教版-选择性必修3《生物技术与工程》课本问题答案の
18.人教版高中生物学新旧教材知识差异の
19.高中生物学核心基础知识整理 / 附高考生物答题规范の
20.高中生物学三年超重要85个核心概念总结の
21.高中生物遗传中的致死问题及遗传题中隐性信息的挖掘の
22.高中生物常见80个考察知识点汇总の
23.权威解答高中生物12个疑难问题の
24.人教社讲解高中生物学新教材——必修1、2の
25.2022年5月26人教社回答老师的196个问题の
26.人教社关于高中生物新教材答疑视频の
27.人教版高中生物学新旧教材知识差异盘点の
31.实验探究——高中生物学实验归纳の
32.林祖荣：双新背景下的生物高考复习 (全)の
34.新人教版—高中生物学五本电子教材、课后问题答案、视频汇总、网络答疑の35.高中生物学核心基础知识整理/附高考生物答题规范の42.小麦的传奇——一株野草如何成为重要的粮食作物の48.生物学新教材必修1详解新教材内容的16个变化の49.高考生物教材中部分容易被忽略的37个问题汇总の57.2022年人教社高中《生物学》新教材网络培训——马建兴：新高考背景下的高三复习的坚守与创新の62.刺激传入神经和传出神经引起的反应属于反射吗+剧烈运动后肌肉酸痛是乳酸大量积累引起的吗の63.高考生物学必修一《分子与细胞》348道判断题及解析+高中生物常考题型答题模板+膝跳反射的完整反射弧の64.39名世界级教师的教学建议+你分得清这学霸都会弄混的20组生物知识点の65.高中生物必修一判断200题+高中生物教材中37个隐形知识点の66.光合作用的产物有哪些+为什么选择MII期卵母细胞作为受体细胞?の68.进化让病毒的毒性越来越弱？且看奥密克戎如何杀死你生殖细胞的の69.高中生物学中常见的不对称性、不可逆性+易混淆核心概念+图解16个高考生物实验原理の70.高中生物五大模块知识点精编汇总+高中生物实验重难点诠释技巧归纳の71.高中生物必修教材1、2、3核心知识点精编（附97个细枝末节和85个高频考点）+从神经递质到体液调节：一氧化氮的“华丽转身”の72.高中生物课本实验及生物发展史+十张表搞定生物实验中的常见试剂+个个都暗藏玄机的生物学49个成语の73.中学生物学期刊订阅、投稿推荐《生物学通报》、《中学生物教学》、《中学生物学》等の74.入侵病毒的免疫逃逸和增殖机制概述+培育无子西瓜和无子番茄区别在哪里の75.高中生物分子与细胞3个知识点+斐林试剂和双缩脲试剂的区别+“观察植物细胞有丝分裂”的实验改进の76.100种常见又叫不出名的植物+植物性神经相关疑难问题解析の77.生物老师的金句良缘+2018-2022五年所有科目高考试题考点分布の78.什么是“表观遗传学”+经典表观遗传学现象分析の
79.培育无子西瓜为什么不用生长素，而无子番茄却要用の
80.有关免疫记忆的若干问题探讨+植物组织培养相关问题释疑の
81.2023年高考命题方向，2023年度高考蓝皮书出炉《中国高考报告（2023）》の
82.高考生物学中经常考的118个“套路”の
83.吴成军评“新高考需要什么样的生物学试题”の
84.高考生物学55个生物考试要点+例谈杂合子中隐性基因是否表达の
85.新高考命题就是对高中生的“降维打击”？
86.如何解决高中生物学生物膜渗透装置再次平衡难题+高考生物必修1、2、3必背知识点浓缩版の
87.人类疾病也受表观遗传的影响+漫画血友病的遗传原理の
88.蜜蜂跳舞——蜜蜂的行为信息+巴氏消毒法の
90.高中生物学教材中的”载体”+生物学难点配图讲解の91.高温环境下体温调节中有激素调节吗？+“神经调节”相关问题的补充の93.神经中枢就是脑和脊髓吗+糖被是一个很文艺的生物学概念の94.刘丹：高中生物学选择性必修3《生物技术与工程》教材解读の95.王颖：高中生物学选择性必修2《生物与环境》教材解读の96.包春莹：高中生物学选择性必修1《稳态与调节》教材解读の97.王颖：高中生物学必修2《遗传与进化》教材解读の98.吴成军：高中生物学必修1《分子与细胞》教材解读の99.刘丹：高中生物学选择性必修3《生物技术与工程》（文字+视频）答疑の100.曹保义：新课标“新”在哪里——《普通高中生物学课程标准（2017年版）》解读の101.例析几种与PCR技术应用相关的教学疑难点の102.谭永平：新教材《生物学》简介——普通高中生物教材修订的整体情况の104.蓝皮书：教育部发布新通知，2023年高考难度大调整の106.吴成军 王颖：人教社高中新教材“必修一、必修二”网络答疑视频文字问题汇总の108.吴成军：“新高考”需要什么样的高考试题+高中生物7大题型的答题模板の109.王德枝：新人教必修教材部分变化的概念摘录の110.新高考“3+1+2”中的“赋分制”解读（各省市等级赋分制计算详解）の111.葡糖糖和氨基酸能进入细胞核吗？+光合色素被光激发后的能量变化の112.衰老细胞细胞核体积增大的原因+新教材关于捕食、拟寄生和寄生の113.2023年高考：两个变动，四大趋势，命题变化の114.2023年高考生物热点预测：科技前沿与诺贝尔奖の115.2023年1月浙江省普通高校招生生物卷（附答案）の116.例谈高中生物学“非选择题”的审题与解题策略+图解体液免疫和细胞免疫的过程の117.吴成军 | 以生命系统的视角提炼生命观念の118.考查生物学核心素养，体现立德树人的国家意志の120.源于高中生物【必修1-3】"教材拓展题"的命题素材+高中生物思维导图の123.STS，STS教育，STSE教育，“STSE教育理念”の124.十张表帮你搞定高考生物学实验中常见试剂的使用の125.2023届东北三省四城市高考备考生物场专题讲座研讨会の130.什么是“大单元教学”？如何进行“大单元教学”设计？の137.PCR技术难点突破+新教材中的“糖”定义变化の138.新教材“光合作用”中[H]的变化+排遗物就是排泄物么の139.新教材从着丝点到着丝粒，为什么要“一字之变”？の140.“细胞的能量‘货币’ATP”教学中的几个典型问题释疑の143.等位基因间的相互作用及非等位基因间的相互作用の161.生物选择性必修二和选择性必修三易混易错122道判断题の163.2019人教版高中生物选择性必修3《生物技术与工程》教材各思考栏目参考答案汇总の164.涵盖超全高中生物知识点的500道判断题+PCR过程中为何一定要引物の165.仅差一个字的生物学概念+DNA的粗提取与鉴定の166.辨析“溶酶体”和“溶菌酶+高中生物学必修一超全名词解释の167.高中必修2《遗传与进化》一般规律中的16个例外の168.2023年高考：新高考还是旧高考？新教材还是旧教材？169.289个高中生物名词解释基础考点+高中生物知识点口诀の170.细胞质基质及其功能+例析几种与PCR技术应用相关的教学疑难点の172.Cell颠覆认知：植物不爽了也能发出声音呐喊の174.选择性必修一《稳态与调节》257道判断题集锦（含解析）、20个问题答疑の176.有关“筛选”的问题归类分析+农杆菌转化法问题探讨の178.PCR引物设计原则的5个要点、常用PCR技术及原理、PCR定点突变技术の179.探讨凝胶电泳实验中7个疑难问题、新教材基因工程电泳图の180.关于“烟草花叶病毒（TMV）侵染实验”你还不知道的事儿+艾弗里实验的探疑の182.选择性必修3《生物技术与工程》出版方答疑の183.122道生物选择性必修二和选择性必修三易混易错判断题+NADH和NADPH是什么？184.碳酸氢钠稀溶液能为光合作用提供所需二氧化碳吗？185.DNA衍射图原理+谈谈物质出入线粒体的方式の
你每一次点“在看”，我都会当成喜欢！